Sang pour PCR. Analyse PCR - avantages, explication et description de la méthode

Pour le diagnostic maladies infectieuses L'analyse PCR est largement utilisée, dont le prix est tout à fait abordable pour les citoyens de notre pays. La méthode est très informative et permet de connaître les résultats le lendemain de la soumission du biomatériau.

Les diagnostics sont effectués à la clinique de l'Académie de Santé Méthode PCR, le prix d'une analyse commence à 300 roubles.

Qu'est-ce qui est pris pour la recherche ?

Pour identifier l'agent pathogène, les biomatériaux de patients suivants sont utilisés pour l'analyse PCR :

• grattages des muqueuses des organes génitaux (souvent prescrits en cas de suspicion d'infections sexuellement transmissibles) ;
• salive;
• sang;
• morceaux de tissu;
• liquide cérébro-spinal;
• secret de la prostate.

Dans notre clinique, vous pouvez faire un test sanguin à moindre coût à Moscou pour effectuer un diagnostic PCR et identifier l'agent pathogène. En raison du contenu informatif élevé de la polymérase réaction en chaîne le médecin sera en mesure de créer un schéma thérapeutique efficace.

Qu'est-ce qui détermine le coût du diagnostic PCR ?

Nous attirons votre attention sur ce qui détermine le prix d’une analyse PCR. Le fait est que le diagnostic peut être qualitatif (la présence d'agents pathogènes spécifiques est déterminée) et quantitatif (la gravité du processus pathologique est déterminée). Cela affecte le coût.

De plus, le prix de l'analyse PCR dépend du nombre d'agents pathogènes qui devront être examinés. Par exemple, rechercher 12 agents infectieux à la fois sera plus rentable en termes d'1 analyse PCR. Le prix vous satisfera.

Diagnostic par méthode PCR

Préparation

Ainsi, si le médecin vous a ordonné de passer des tests d'infection et que le prix vous convient, vous devez vous préparer à la collecte du biomatériau.

1. Lors d'un frottis sur les organes génitaux, évitez les rapports sexuels 36 à 48 heures avant, ne vous douchez pas le matin, ne vous lavez pas, n'urinez pas pendant 3 heures avant de gratter. Si une femme suit un traitement avec des médicaments antibactériens ou antiviraux, le résultat ne sera pas informatif.
2. Si vous devez donner de la salive, faites-le à jeun, en vous rinçant la bouche avec de l'eau propre.
3. Si vous devez examiner votre urine, après votre réveil, vous devez d'abord vous laver, puis collecter 50 à 60 ml d'urine.
4. Lors du don de sperme, vous devez vous abstenir de relations sexuelles pendant 3 jours, ne pas aller aux bains publics, ne pas boire d'alcool et ne pas manger de nourriture épicée. Pendant 3 heures avant le test, évitez d'uriner.

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Publications de médecins

Pour un traitement réussi, le plus point important est un diagnostic rapide et sans erreur. DANS Dernièrement La liste des méthodes et des capacités des centres de diagnostic, des cliniques et des hôpitaux dans le domaine du diagnostic s'allonge constamment. Après l'émergence d'une technique relativement nouvelle - l'analyse PCR, cette méthode a rapidement gagné des adeptes parmi travailleurs médicaux, car il est souvent indispensable pour identifier les maladies infectieuses.

Le champ d'application de la méthode basée sur la réaction en chaîne par polymérase ne se limite pas à la médecine, mais le diagnostic PCR est devenu le plus répandu pour identifier diverses maladies.

Les avantages indéniables de la PCR sont les suivants :

• Très haute sensibilité. On parle généralement d'une sensibilité de 95 à 100 %, mais ce sont des données moyennes. Cet indicateur diffère selon les micro-organismes. Ainsi, pour l'hépatite C, il n'est jamais inférieur à 97 % (à condition que toutes les conditions soient remplies) et pour la détermination de l'uréeplasmose, il n'est pas inférieur à 99 %. Cette sensibilité est la plus élevée ce moment, la méthode n'a donc presque pas de concurrents dans cette caractéristique.
• Possibilité d'utilisation dès les premiers stades.À une époque où d’autres méthodes de diagnostic ne permettent pas encore d’identifier l’agent pathogène en raison de sa faible quantité dans l’échantillon, la PCR produit déjà le résultat correct. La présence d’un agent pathogène peut être détectée même en présence d’un seul échantillon et, dans certains cas, d’un seul fragment du microbe. Pour cette raison, la méthode est également utilisée pour les pathologies chroniques ou latentes, ainsi qu’en phase d’incubation.
• Large gamme de résultats. L'analyse est capable d'identifier plusieurs agents pathogènes en même temps, ce qui ne nécessite pas de manipulations répétées. Parfois, il est possible de détecter des agents pathogènes auxquels on ne s'attendait même pas lors du diagnostic initial.
• Polyvalence des échantillons. L'échantillon peut comprendre des échantillons de sang, de salive, d'expectorations, de cheveux, de pertes vaginales et de cellules de divers tissus.
• Rapidité d'obtention des résultats. Dans la plupart des cas, la réponse est reçue dans les 5 à 6 heures. Pour un test de culture proche de la réaction en chaîne par polymérase en termes de précision, le même résultat peut être obtenu en quelques jours à quelques semaines.
• Détermination quantitative du pathogène. Ce paramètre permet de déterminer le titre de microbes dans le matériau, et cette propriété est souvent nécessaire pour évaluer l'efficacité des tactiques de traitement choisies.
• Identification du micro-organisme lui-même, et non détermination de ses réactions. La plupart des analyses sont basées sur la réponse de l'agent pathogène aux réactifs chimiques, à la coloration, etc. Cette méthode de diagnostic permet de détecter le microbe directement, et non des signes indirects, des anticorps, etc.

Malgré une si large liste d'avantages, la méthode présente également certains inconvénients :

• Une fausse détection de micro-organismes peut se produire en raison de la contamination d’un échantillon par un échantillon précédent. Cela se produit lorsque les instruments ou réactifs impliqués dans l’analyse sont contaminés. Même dans l'air, il y a des fragments de microbes qui peuvent affecter les résultats, c'est pourquoi dans ces laboratoires, un filtre biologique avec le degré maximum de purification de l'air doit être installé.
• Résultat faussement négatif. Même avec toutes les manifestations évidentes de la maladie, des données négatives sont parfois obtenues. La raison en est le mauvais endroit pour prélever l'échantillon, le personnel du laboratoire doit donc avoir des qualifications, des connaissances et une expérience suffisantes.
• Les données doivent être évaluées exclusivement par le médecin traitant, car l'interprétation des résultats de l'analyse PCR est un processus complexe. Une réponse positive n’est pas toujours synonyme de maladie. Le fait est qu'une fois la maladie traitée avec succès, des fragments de l'agent pathogène sont présents dans le sang pendant une longue période, de sorte que seul un spécialiste très qualifié peut tirer une conclusion.
• Coût élevé des diagnostics par réaction en chaîne par polymérase. Le prix est dû à un équipement coûteux et à des exigences élevées en matière de conditions de laboratoire et de qualifications du personnel.

Conditions obligatoires pour obtenir des données précises dans les laboratoires PCR :

• mécanisme correct pour collecter les échantillons et leur transport correct jusqu'au laboratoire ;
• respect strict des méthodes lors de l'analyse ;
• haute stérilité et automatisation maximale du processus ;
• utilisation d'instruments jetables;
• système de contrôle interne du laboratoire pour confirmer la fiabilité des données.

À condition que toutes les exigences soient remplies, sur la base des données obtenues à l'aide de la technique PCR, il est possible non seulement de déterminer la maladie, mais aussi de faire un pronostic de son évolution et de créer un algorithme de traitement.

L'essence de la méthode

La réaction en chaîne par polymérase permet de copier et de reproduire rapidement les chaînes d'ADN du microbe à l'origine de la maladie. Pour que le processus se déroule rapidement, des préparations enzymatiques spéciales sont utilisées pour accélérer la réplication et la construction d'une chaîne de nucléotides.

Une fois la procédure terminée, la présence de l'agent pathogène dans l'échantillon augmente des millions de fois, après quoi sa détection et son identification ne posent plus de problème.

Le technicien de laboratoire peut comparer l'échantillon obtenu avec ceux présentés dans la base de données et le nommer avec précision, ainsi que déterminer sa quantité d'origine.

De plus, la technique vous permet de cloner des sections individuelles d'une chaîne d'ADN, d'y provoquer les mutations nécessaires et de combiner et de combiner des sections entre elles.

Zones d'application

Les diagnostics PCR sont les plus largement utilisés en médecine. Il peut être utilisé pour identifier les virus, les infections, maladies héréditaires, et cela peut être fait non seulement pendant la phase active, mais également immédiatement après l’infection.

Domaines de la médecine dans lesquels la méthode PCR est activement utilisée pour le diagnostic :

• urologie et gynécologie - pour détecter la plupart des maladies sexuellement transmissibles (uréeplasmose, herpès, syphilis, gonorrhée, gardnerellose, trichomonase, chlamydia, VIH, mycoplasmose, virus du papillome humain, candidose, etc.) ;
• pneumologie - pour la tuberculose ou la pneumonie de nature bactérienne ou virale ;
• gastro-entérologie - pour l'hélicobactériose;
• en hématologie - avec le cytomégalovirus, divers oncovirus sanguins ;
• dans le domaine des maladies infectieuses - pour détecter la diphtérie, la salmonellose, la mononucléose, la listériose, l'hépatite d'origine virale, l'encéphalite ;
• en oncologie - pour déterminer le cancer du sein, la leucémie, le lymphome.

Cette méthode est également utilisée en néonatalogie, en pédiatrie, en ophtalmologie, en neurologie - dans presque toutes les branches de la médecine, elle s'est avérée nécessaire.

La vidéo décrit en détail quelles infections peuvent être détectées grâce à la réaction en chaîne par polymérase.

La plupart des maladies sexuellement transmissibles sont diagnostiquées rapidement et avec succès grâce au diagnostic PCR. En plus d'identifier l'agent pathogène, cette méthode permet de connaître la souche spécifique du micro-organisme, ce qui permet de sélectionner le médicament le plus efficace pour le traitement.

Outre la médecine, la méthode PCR est également utilisée dans d'autres domaines :

• Médecine légale et médecine légale - Aide à identifier un criminel en comparant le matériel génétique du suspect avec des échantillons trouvés sur les lieux du crime.
• Établir la paternité - les ensembles génétiques multipliés du parent et de l'enfant sont comparés, des fragments identiques sont trouvés, sur la base desquels on peut juger du degré de leur relation.
• La science utilise la technique dans des expériences, en utilisant des mutations génétiques, en établissant la relation entre les branches évolutives d'organismes individuels, etc.

Diagnostic PCR en vénéréologie

De nombreuses infections qui provoquent des maladies sexuellement transmissibles aux stades initiaux ont des manifestations et des symptômes très similaires, il est donc assez difficile de les différencier. Dans le même temps, l'identification précoce de l'agent infectieux permet de commencer le traitement le plus tôt possible et de réduire la durée du traitement au minimum, évitant ainsi le développement d'éventuelles complications.

La réaction en chaîne par polymérase est un mécanisme efficace pour identifier les groupes de maladies génitales suivants :

• infections bactériennes (syphilis, donovanose, gonorrhée, chlamydia, etc.) ;
• pathologies virales (papillomatose, condylomatose, VIH, herpès génital, etc.) ;
• champignons (muguet, balanoposthite, etc.)

En dermatovénérologie, la propriété de cette technique de détecter des agents infectieux pendant les périodes de rémission ou pendant le portage, lorsqu'une personne peut infecter ses partenaires sans présenter de symptômes de la maladie, est particulièrement utile.

Progrès de l’analyse de la réaction en chaîne par polymérase

L'analyse PCR se déroule en 4 étapes principales :

• préparer du matériel à copier;
• combiner un fragment d'ADN et une amorce ;
• copier l'ensemble génétique du matériel étudié ;
• identification et évaluation de l’ensemble d’ADN résultant.

Étape 1

L'échantillon est chauffé à une température de 94-98°C dans appareil spécial- un thermocycleur programmé pour maintenir des températures précises avec une faible erreur. La température réglée est maintenue pendant une minute ou deux. Ceci est nécessaire pour dénaturer l’ADN afin que la double hélice se sépare en deux brins distincts.

Étape 2

La température dans le cycleur thermique est réduite à 72-75°C afin que l'amorce puisse reconnaître une section de la chaîne d'ADN qui lui est similaire et s'y combiner.

Les amorces sont réactifs spéciaux, qui ne conviennent qu’à un seul type d’agent pathogène. S'il est nécessaire d'analyser plusieurs agents pathogènes, le nombre requis d'amorces est ajouté à l'échantillon.

A ce stade, l’ADN réplique sa matrice à l’aide d’une amorce.

Les capacités du laboratoire sont limitées par la disponibilité d'amorces pour des micro-organismes spécifiques, de sorte que l'éventail des possibilités est déterminé par la disponibilité de ces échantillons.

Étape 3

Dans ce segment, il y a une augmentation du matériel génétique de l'agent pathogène. Une enzyme s'approche de l'amorce avec la matrice et reproduit un nouveau brin d'ADN identique à celui contenu dans le brin d'origine.

Lorsque la synthèse est terminée, un cycle complet de réaction en chaîne par polymérase est terminé. Dans le temps, cela dure en moyenne jusqu'à 3 minutes. Pendant ce temps, la matière double. Une nouvelle augmentation du nombre de chaînes se produit dans progression géométrique, et à la fin de l'analyse, il parvient à effectuer 50 à 80 cycles.

Étape 4

Une étape qui demande une attention et un soin particulier de la part du staff.

La détermination du micro-organisme s'effectue par électrophorèse ou par coloration. Lors de l'électrophorèse, le facteur déterminant est la longueur des fragments d'ADN et, lors de l'utilisation de marqueurs, l'évolution de la couleur au cours de la réaction enzymatique.

Types de tests PCR

Il existe de nombreuses variantes de ces diagnostics PCR. Le choix d'une méthode particulière dépend de nombreux facteurs : le diagnostic présomptif, les capacités des laboratoires disponibles, la méthode de collecte du matériel, etc.

Les types de PCR les plus couramment utilisés sont :

• imbriqué;
• fait un pas;
• avec démarrage à chaud ;
• virtuel;
• asymétrique;
• en temps réel, etc.

La PCR en temps réel est principalement utilisée, car la méthode se caractérise par les résultats les plus précis et vitesse maximum traitement de l'information. Après utilisation, la conclusion est prête en une heure ou deux.

La méthode est largement utilisée en pédiatrie pour détecter les virus et les infections sanguines, les maladies génétiques et les infections TORCH. Les néonatologistes prescrivent de tels diagnostics dans les cas problématiques dès les premiers jours de la vie. Parfois, de tels diagnostics permettent de détecter une infection des liquides intra-utérins, qui constituent un danger pour le développement du fœtus pendant la période de formation active.

Si un médecin demande un examen par réaction en chaîne par polymérase, il doit alors clarifier quel type de biomatériau doit être fourni au patient et comment se préparer au prélèvement d'échantillons.

Analyse de sang

Le sang est prélevé comme biomatériau pour tester si le VIH, l'hépatite virale, le toxoplasme, l'herpès génital et la cytomégalie sont suspectés. Pour la plupart de ces agents pathogènes, avant l’utilisation de cette méthode, le diagnostic reposait sur la détection d’anticorps dirigés contre l’agent pathogène, ce qui retardait considérablement le moment de détection des microbes pendant la période où les anticorps n’avaient pas encore été produits.

Dans ce cas, avant de donner du sang à des fins de diagnostic, aucune préparation particulière n'est nécessaire, mais il est préférable que l'échantillon soit prélevé à jeun. La seule circonstance qui peut sérieusement fausser les résultats est l'utilisation d'antibiotiques, c'est pourquoi le test doit être précédé d'une période de plusieurs jours ou semaines après la prise de ces médicaments, selon le type d'antibiotique.

Dans les cliniques les plus modernes, des systèmes à vide ont récemment été utilisés pour collecter du sang pour la PCR, ce qui endommage peu la peau et minimise le risque de contamination de l'air, des instruments ou des mains des techniciens de laboratoire pénétrant dans l'échantillon.

Analyse de frottis

Il est utilisé aussi bien en gynécologie qu'en vénéréologie pour déterminer les maladies sexuellement transmissibles. Le frottis PCR est souvent prescrit pendant la grossesse pour identifier les facteurs cachés pouvant affecter négativement la formation du fœtus ou le déroulement de la grossesse.

La préparation à la sélection du matériel consiste à éliminer complètement les rapports sexuels plusieurs jours avant l'intervention. Les douches vaginales avec du permanganate de potassium ou des infusions de plantes sont également interdites. Pendant les jours critiques et 2 jours après eux, aucun frottis n'est réalisé pour analyse PCR.

Le biomatériau est collecté en laboratoire à partir du vagin, du col de l'utérus, du canal cervical ou de l'urètre.

L'analyse PCR d'un frottis permet d'identifier un agent pathogène résistant à un certain type d'antibiotique. De plus, les indications pour ce type examen diagnostique haut-parleurs:

• grossesse compliquée sans raison apparente ;
• évolution aiguë d'une maladie vénérienne;
• présomptif évolution chronique maladie vénérienne;
• identifier les causes de l’infertilité ou des avortements spontanés.

Analyse des selles

Un test de selles par réaction en chaîne par polymérase est prescrit par un spécialiste pour déterminer la présence d'une infection. La préparation au prélèvement d’un échantillon de selles pour PCR est la suivante :

• éliminer les laxatifs sous forme de suppositoires, d'huiles ou de médicaments oraux pendant plusieurs jours ;
• Ne consommez pas de médicaments ou d'aliments qui donnent aux selles une couleur distincte la veille.

Le matériel pour la détermination PCR est mieux livré dans un récipient spécial pour selles avec un bâton. L'intérieur du récipient est stérile, il ne doit donc pas être essuyé ou lavé. Lors du prélèvement d'échantillons, il est important de surveiller afin de ne pas déranger surface intérieure récepteur, il ne doit pas non plus y avoir de traces d’urine dans l’échantillon. Avant la sélection, l'usage des lavements est interdit.

Analyse d'urine

Cette étude PCR permet d'extraire un échantillon d'ADN d'un virus ou d'une bactérie. Il est préférable de recueillir les urines le matin à jeun. Il est préférable que cela se fasse directement en laboratoire.

Conditions de préparation obligatoires pour l'obtention des résultats d'analyses d'urine dans un laboratoire de réaction en chaîne par polymérase :

• attendre 3 semaines après avoir pris des antibiotiques ;
• ne buvez pas et ne mangez pas avant de collecter des liquides ;
• interdiction des relations sexuelles vaginales un jour avant le prélèvement ;
• Vous devez placer la première portion de matériau dans le récipient après votre réveil.

Interprétation des résultats

Les résultats du diagnostic sont décryptés par le spécialiste qui a adressé le patient pour le test PCR. Le protocole délivré par le laboratoire peut comporter un résultat PCR négatif ou positif :

• Négatif - un cas dans lequel aucun fragment de l'agent causal de la maladie présumée n'a été trouvé, c'est-à-dire que la personne est en bonne santé et n'a pas souffert de cette maladie récemment.
• Positif - L'ARN ou l'ADN d'un agent pathogène est détecté dans l'échantillon et la personne a besoin d'un traitement.

Vous ne devez pas interpréter vous-même les données obtenues, car les normes d'âge peuvent différer considérablement et différents titres indiquent des stades complètement différents de la maladie et des approches thérapeutiques.

Armé des résultats du diagnostic PCR, il sera facile pour le médecin d'en déterminer la liste mesures nécessaires traitement.

La précision du diagnostic PCR a rendu cette technique indispensable pour diagnostiquer une vaste liste de maladies et a permis d'identifier et d'éliminer plus efficacement les processus pathogènes survenant dans le corps humain.

La PCR (réaction en chaîne par polymérase) est une méthode spécifique très sensible de diagnostic des maladies virales, réalisée à l’aide de tests de génétique moléculaire du sang du patient. Cette méthode de diagnostic permet également de détecter des maladies héréditaires. Grâce à la PCR, non seulement le diagnostic est déterminé, mais également le stade auquel se situe la maladie. Parlons du diagnostic des infections par la méthode PCR, découvrons la signification des résultats et bien plus encore.

Le développeur de la méthode de réaction en chaîne par polymérase était l'Américain Kary Mullis, qui l'a créée en 1983. En 1993, Carey a reçu prix Nobel dans le domaine de la chimie.

L’analyse PCR est la référence en matière de diagnostic des maladies. Sans cette méthode, il serait impossible de poser un diagnostic définitif et donc d'appliquer un traitement adéquat. Très souvent, l’analyse devient la seule méthode permettant d’identifier les infections actives dans l’organisme lorsque les autres méthodes se sont révélées inefficaces.

Méthode de réaction en chaîne par polymérase

En savoir plus sur la méthode de réaction en chaîne par polymérase.

Le test consiste à dupliquer plusieurs fois l’ADN ou l’ARN à l’aide d’enzymes et est effectué en laboratoire. De cette manière, la quantité de matériau nécessaire à l'analyse visuelle est formée. Lors de l'exécution de la PCR, seule la section souhaitée est copiée, qui correspond aux paramètres spécifiés.

Par exemple, du matériel biologique humain, qui contient probablement un agent pathogène, est placé dans un cycleur. Ensuite, les enzymes ajoutées au réacteur se lient à l’agent pathogène et une copie de l’ADN et de l’ARN est synthétisée. La copie s'effectue en plusieurs étapes, qui forment une réaction en chaîne, produisant des centaines de copies à partir du même matériel génétique. Après cela, les techniciens de laboratoire effectuent une analyse et comparent les résultats avec les informations de la base de données. La PCR produit des résultats de recherche à la fois qualitatifs et quantitatifs.

Cette méthode est largement utilisée en médecine : elle est utilisée pour mener des expériences de mutation et d'épissage de l'ADN, ainsi que pour d'autres expériences.

Avantages du diagnostic des infections virales par PCR

• La sensibilité du test est très élevée et permet de détecter même des agents pathogènes isolés. La sensibilité est de 10 à 1 000 cellules d'une image du matériau. A titre de comparaison, la sensibilité des tests microscopiques ne dépasse pas 105 cellules ;
• La spécificité de la PCR réside dans haut niveau, qui permet de déterminer la région ARN et ADN de l'agent pathogène. Ainsi, le test ne produit pas de faux indicateurs ;
• La PCR détecte directement l'agent viral, l'agent causal de l'infection, dans l'échantillon testé ;
• Le test est réalisé très rapidement. Dans les 4 heures, vous pouvez évaluer les résultats de l'étude ;
• Une technique de recherche universelle permet de détecter différents types agent pathogène. Un échantillon peut être utilisé pour détecter plusieurs types d’agents pathogènes.
• Grâce à la PCR, des diagnostics précliniques et rétrospectifs peuvent être effectués. Les diagnostics précliniques identifient les agents pathogènes avant même l'apparition de la maladie, et les diagnostics rétrospectifs sont effectués après l'apparition de la maladie. Cela permet de réaliser l'étude pendant la période d'incubation de la maladie, lorsqu'il n'y a pas encore de problèmes de santé, mais que le patient est déjà infecté par le virus. Il est également possible d’identifier une infection latente asymptomatique.
• La PCR peut être réalisée sur des échantillons de matériel d’archives ou sur des restes biologiques. Cela aide à l’identification ou à la paternité.

En plus, diagnostic par méthode PCR Récemment, il s'est développé activement. Ainsi, de plus en plus de nouveaux tests destinés à la recherche apparaissent. Ainsi, le prix de ces tests diminue chaque année, ce qui rend la méthode accessible à un grand nombre de personnes.

Infections détectables

Infections pouvant être détectées dans le corps humain par réaction en chaîne par polymérase :

• hépatite A, B, C, G ;
• mononucléose;
• infection à cytomégalovirus ;
• infection herpétique, types 1 et 2 ;
• infections sexuellement transmissibles (chlamydia, trichomonase, mycoplasmose, uréeplasmose et autres);
• tuberculose;
• virus oncogènes (papillome);
• listériose;
• la borréliose;
• encéphalite à tiques;
• Infection à Helicobacter pylori, ainsi que d'autres infections.

Le diagnostic par méthode PCR est répandu dans de nombreuses branches de la médecine, par exemple en urologie, gynécologie, phtisiologie, oncologie et autres.

Analyse

Les résultats et le calendrier de l'analyse PCR effectuée à l'aide de la méthode de réaction en chaîne par polymérase sont publiés dans les deux jours suivant la soumission des échantillons pour analyse. Parfois, les résultats sont produits en 1 jour.

Règles de collecte de matériel pour la recherche PCR

Presque tous les patients qui donnent du matériel pour le diagnostic PCR peuvent compter sur des résultats fiables et rapides. Cependant, la pureté de l’analyse dépend également du patient qui collecte le matériel. Le matériel à analyser doit être collecté dans des conditions empêchant sa contamination, ce qui peut affecter considérablement l'objectivité du résultat.

• la veille du test, évitez les rapports sexuels ;
• Le prélèvement sanguin s'effectue uniquement le matin, à jeun, ce qui signifie qu'on ne peut ni manger ni boire avant de prélever du sang ;
• L'urine pour analyse est soumise dans un récipient stérile et seule l'urine du matin est collectée.

Pour les recherches utilisant la méthode PCR, on collecte du matériel biologique susceptible de contenir des bactéries pathogènes. Il pourrait être:

• sang,
• salive,
• des échantillons de mucus provenant des muqueuses,
• placenta,
• urine,
• expectorations,
• grattage,
• liquide amniotique et liquide pleural.

Pour effectuer des tests de dépistage des infections sexuellement transmissibles, des échantillons d'écoulement des organes génitaux sont prélevés.

Des échantillons de sang sont prélevés. Pour tester la mononucléose, un prélèvement de gorge est effectué et pour diagnostiquer le CMV, des échantillons d'urine sont prélevés. Le liquide céphalo-rachidien est prélevé pour diagnostiquer les lésions système nerveux personne.

En cas d'infections intra-utérines, le tissu placentaire et le liquide amniotique sont collectés.

Les résultats d'analyse

Les résultats du test PCR peuvent être positifs ou négatifs. Si le résultat du test PCR est négatif, le corps du patient n’a pas été infecté et est donc en bonne santé. À résultat positif nous pouvons confirmer la présence d’agents pathogènes infectieux dans le corps du patient.

Il existe également un portage sain de bactéries, dans lequel le patient ne présente aucun symptôme de la maladie. Dans ce cas, le résultat PCR sera positif. Mais nous ne pouvons pas parler ici d’infection active. Dans ce cas, aucun traitement n’est nécessaire, mais il est nécessaire de consulter régulièrement un médecin. Ce phénomène est courant dans des maladies telles que le VPH, l'herpès, le CMV et autres.
Il est très important de rappeler qu’un porteur de l’infection peut la transmettre personne en bonne santé. En outre, le porteur lui-même peut entrer dans la phase chronique de la maladie.

Diagnostic PCR- explication vidéo

Les gens ont commencé à parler d’analyse PCR pour la première fois en 1983. Cette technique a été développée par Kary Mullis et les membres de son laboratoire. Depuis lors, la popularité de l’étude n’a cessé d’augmenter, car elle présente un nombre important d'avantages par rapport aux autres méthodes.

Aujourd’hui, le diagnostic PCR constitue la référence ou la norme pour identifier les infections et les agents pathogènes, en particulier ceux asymptomatiques. Tout d’abord, il s’agit d’un diagnostic préclinique.

Réaliser une analyse dans une machine PCR

L'essence de l'analyse PCR est que les séquences sont clonées (augmentées plusieurs fois) dans un tube à essai acides nucléiques(ADN ou ARN) caractéristique d’un type particulier d’agent pathogène.

L'abréviation PCR signifie réaction en chaîne par polymérase.

maison caractéristique cette méthode– c'est une amplification, c'est-à-dire créer un grand nombre de copies du gène requis ou de son fragment. Tout cela est produit à l'extérieur du corps, c'est-à-dire in vitro.

Ainsi, si 20 cycles de PCR sont effectués, on obtient environ 1 million de copies ou plus. Cela permet de détecter une infection même lorsque sa quantité est insignifiante dans le matériel source, alors que les autres méthodes d'analyse sont impuissantes. Cela détermine la haute sensibilité de cette méthode.

En termes simples, vous pouvez faire l'analogie suivante : vous ne remarquerez pas un seul petit grain de sable sur le sol, mais après avoir augmenté le nombre de grains de sable un million de fois (PCR), un tas de sable sera déjà clairement visible .

Les principaux avantages du dépistage des infections par la méthode PCR sont :

• sensibilité la plus élevée et spécificité par rapport aux autres méthodes utilisées pour détecter les agents infectieux ;
• la capacité de détecter des micro-organismes dans diverses matières biologiques (sang, urine, sécrétions vaginales, salive, etc.) ;
• la capacité d'identifier simultanément plusieurs micro-organismes responsables, le cas échéant. A titre de comparaison, l'utilisation de méthodes bactériologiques n'offre pas une telle opportunité, car demande requise environnements différents pour cultiver divers microbes pathogènes;
• la possibilité de transporter du matériel biologique, car Pour identifier un pathogène, il n’est pas nécessaire de le maintenir en vie ;
• rapidité d'analyse;
• précision du diagnostic étiologique ;
• la possibilité de détermination quantitative des agents pathogènes - particulièrement importante pour les microbes opportunistes, qui ne sont capables de provoquer des maladies qu'après avoir atteint une certaine concentration ;
• la capacité de contrôler le déroulement du processus infectieux pendant le traitement.

Analyse PCR pour les infections

Actuellement, la majorité des maladies infectieuses sexuellement transmissibles (et autres) sont déterminées à l'aide de la méthode de réaction en chaîne par polymérase. Le diagnostic s'est répandu en raison de sa sensibilité et de sa spécificité élevées.

L'analyse PCR pour la chlamydia est particulièrement populaire.

Cela est dû au fait que ces micro-organismes vivent de manière intracellulaire, ce qui crée certaines difficultés dans leur détection.

Le diagnostic PCR permet de détecter même une quantité minime de chlamydia, ce qui, en règle générale, ne conduit pas encore à l'apparition de symptômes cliniques. Même la présence de seulement 2 molécules d'acides nucléiques dans le matériel de test permet d'identifier l'infection causale.

Et c’est la clé d’un traitement réussi, qui commence dès le stade préclinique.

Les infections sont également déterminées :

• hépatite virale;
• tuberculose;
• encéphalite à tiques;
• diverses maladies sexuellement transmissibles, etc.

Le diagnostic PCR vous permet de résoudre un certain nombre d'autres problèmes importants :

• surveiller le traitement et évaluer son efficacité ;
• détermination de la « charge virale », sur la base de laquelle une dose individuelle du médicament est sélectionnée ;
• identification de souches de micro-organismes pharmacologiquement résistants (insensibles aux médicaments).

Préparation à l'examen

Il n’est pas nécessaire de se préparer spécifiquement au test, qui sera réalisé selon la méthode PCR. Il est cependant très important qu'un spécialiste récupère le matériel conformément à toutes les conditions nécessaires stérilité.

Ainsi, par exemple, des systèmes de vide spéciaux doivent être utilisés pour prélever du sang, des tubes spéciaux doivent être utilisés pour prélever des sécrétions génitales, etc.

Dans certains cas, le matériel doit être transporté au laboratoire. Pour ce faire correctement, il est nécessaire de fermer hermétiquement le récipient contenant du matériel biologique. Cela empêchera la pénétration d'autres micro-organismes vivant dans l'environnement extérieur.

Les résultats de l'analyse PCR peuvent être de deux options :

• positif – agent pathogène détecté ;
• négatif – l’agent pathogène n’a pas été identifié.

Il faut savoir que même en l’absence de symptômes cliniques, un résultat positif peut être obtenu.

Dans ce cas, il est nécessaire de se concentrer sur les données de la réaction polymérase, car il permet d'identifier la maladie au stade préclinique.

Parfois, une réponse discutable peut être obtenue lorsque le nombre de copies détectées correspond à la limite supérieure de la normale. Pour clarifier la cause de la maladie, l'analyse doit être répétée, en accordant une attention particulière aux conditions de collecte du matériel biologique.

Quelle est la précision du diagnostic PCR ?

Les principaux avantages du diagnostic PCR peuvent être formulés sous la forme de plusieurs thèses :

• la possibilité d'obtenir un grand nombre de copies de micro-organismes pathogènes ;
• un grand nombre de les copies sont la clé d’un séquençage (détection) réussi.

Cela garantit une grande précision de l’analyse PCR pour la détection des agents pathogènes intracellulaires et des micro-organismes à croissance lente.

Par conséquent, la méthode est particulièrement informative pour identifier les mycobactéries tuberculeuses et d’autres agents infectieux similaires. Il a la plus grande précision et ne nécessite pas de revérification des résultats obtenus (sauf cas occasionnels).

Pour obtenir les résultats les plus fiables, il est nécessaire de remplir deux conditions de base qui empêchent une infection exogène (externe) :

• sélection correcte du matériel;
• transport correct.

En médecine moderne, l’analyse PCR des fluides biologiques du corps est très précise et informative. Grâce à cette analyse, la présence de particules virales et microbiennes dans l'organisme est détectée, même si la maladie est cachée et ne donne aucun symptôme.

Que signifie vous prescrire un test PCR ? Cette abréviation signifie méthode de réaction en chaîne par polymérase - il s'agit d'une manière particulière de réaliser recherche en laboratoire. Avec cette méthode, le matériel biologique obtenu du patient est placé dans appareil spécial. Un ensemble d'enzymes réactives est ajouté au milieu de test, ce qui permet de reproduire le matériel génétique de l'agent pathogène (virus ou microbe). La réaction produit un grand nombre de copies d’ADN ou d’ARN, permettant une identification par comparaison avec une base de données d’infections virales et microbiennes.

Que signifie le résultat du test PCR ? S'il existe un agent causal d'une infection dans le corps humain, même caché, cette analyse révélera non seulement sa présence, mais également la quantité dans laquelle cette infection est présente dans le corps.

Pour tester les infections à l'aide de la méthode PCR, vous pouvez examiner tous les fluides biologiques du corps : sang, urine, salive, sécrétions génitales, mucus de la gorge et du nez. L'analyse nécessite très peu de matériel, car si des agents pathogènes sont présents, en reproduisant leurs copies, la concentration de l'information génétique est portée à un niveau tel qui permettra d'identifier le microbe ou le virus et de déterminer son type. La précision de l'analyse PCR est très élevée et grâce à cette analyse, il est aujourd'hui possible de déterminer presque toutes les infections virales, microbiennes et autres largement répandues.

Mais que révèle le plus souvent l’analyse PCR ? La liste des infections pouvant être détectées par cette méthode comprend les infections infectieuses, y compris les infections socialement dangereuses telles que la tuberculose ou les hépatites B et C. La même méthode peut détecter l'infection par le VIH, les infections à Chlamydia et à l'uréeplasma, les mycoplasmoses du système respiratoire et génital. Grâce à cette analyse, le muguet, la vaginose bactérienne et la trichomonase sont détectés. Les capacités de cette méthode nous permettent d'identifier infections cachées- herpès de différents types, HPV (papillomavirus), ainsi que l'identification d'un microbe spécial responsable du développement des ulcères d'estomac - Helicobatera.

Aujourd’hui, vous pouvez passer un test PCR dans presque tous les laboratoires privés ou publics. Ces types de tests sont effectués sur tout le monde, enfants et adultes. Selon le but de l'analyse, différents matériels biologiques sont analysés en fonction du sexe.

Ainsi, l'analyse PCR chez l'homme est réalisée sur le sang ou les urines, les sécrétions urétrales, les mucus de la gorge ou du nez, le suc de la prostate ou encore le sperme. L'analyse PCR chez la femme est possible dans le sang et l'urine, les sécrétions vaginales, les écoulements urétraux, le mucus nasal et pharyngé.

L'analyse PCR est très souvent utilisée pendant la grossesse ; grâce à elle, des infections cachées sont détectées dans les sécrétions vaginales ou le sang, nécessitant une surveillance particulière pendant cette période, et parfois un traitement adéquat.

Comment se déroule la PCR ?

Un test d'infection utilisant cette méthode est prescrit par un médecin et le matériel est souvent collecté immédiatement au cabinet du médecin - un urologue ou un gynécologue. Comment se déroule l’analyse PCR ?

Le matériau étudié est mélangé à des réactifs en laboratoire et la réaction est attendue. Lorsque des agents pathogènes sont présents, des copies de leur ADN ou de leur ARN se multiplient. L'appareil compare les fragments de matériel génétique identifiés avec des bases de données et identifie avec précision l'agent infectieux. Si nécessaire, la quantité d'agent pathogène présente dans certains fluides corporels est également indiquée. En règle générale, l'étude ne dure pas plus de 1 à 2 jours et si nécessaire, des tests express sont effectués.

D’où obtenez-vous l’analyse PCR ? Cela dépendra des types d’agents pathogènes suspectés. S'il s'agit du VIH ou d'une hépatite, du sang est prélevé, s'il s'agit d'infections sexuellement transmissibles, un frottis est prélevé sur l'urètre ou le vagin. Si une mononucléose ou un herpès est suspecté, un prélèvement de gorge est effectué. L'urine, le liquide céphalorachidien, les écoulements de plaies, les crachats, etc. peuvent également être utilisés.

Test sanguin PCR

Pour des résultats précis et un diagnostic des infections, il est important de donner du sang le matin à jeun. Un test sanguin par PCR peut identifier des agents pathogènes maladies dangereuses- VIH, hépatite, syphilis. Pendant les périodes d'exacerbation et d'activité du virus, des virus de l'herpès, des papillomes et quelques autres peuvent être détectés dans le sang.

Analyse PCR : préparation

Pour l’exactitude absolue de l’analyse, une préparation appropriée est importante. La façon la plus simple de se préparer à une prise de sang est qu'il n'y a aucune restriction en matière de régime alimentaire ou d'activité : le sang doit être prélevé le matin, à jeun. Un test d'urine est effectué après avoir lavé les organes génitaux, de la partie médiane dans un récipient stérile spécial. L'analyse PCR du tractus génital mérite une attention particulière, il est donc important de savoir comment s'y préparer. Un jour avant l'examen, les rapports sexuels sont interdits, il est recommandé de ne pas uriner avant l'examen. Pendant la menstruation chez la femme, la date de l'analyse est reportée de 3 à 5 jours à compter du dernier écoulement.

Combien de temps faut-il pour réaliser un test PCR ?

Selon les capacités du laboratoire, l’analyse peut être préparée de plusieurs heures à plusieurs jours. En moyenne, combien de jours dure un test PCR ? Habituellement c'est seul -deux jours. En cas d'urgence, l'analyse peut être réalisée le jour même, en quelques heures.