Précision des diagnostics moléculaires utilisant la méthode PCR. Réaction en chaîne par polymérase (diagnostic PCR)

Méthode polymérase réaction en chaîne, ou PCR, est utilisée dans le diagnostic en laboratoire de la plupart maladies infectieuses. Il permet de détecter le matériel génétique des micro-organismes dans le matériel étudié et ainsi de les identifier.

Ce que c'est

La méthode a été développée en 1983 et son auteur, Mullis, a reçu le prix Nobel en 1993.

Bases de la méthode

Chaque type de micro-organisme, de plante ou d’animal possède un ensemble unique de chromosomes. Ils sont formés d'ADN - acide désoxyribonucléique. Les petits fragments d'ADN sont appelés nucléotides et leur séquence spécifique constitue un gène. Chaque gène code pour la synthèse d'une protéine, par exemple le collagène, l'albumine et toutes les autres. La séquence nucléotidique est unique. Pour chaque espèce d’organisme vivant, il existe des sections communes d’ADN qui sont responsables de l’uniformité au sein de cette espèce.

L'analyse de l'ADN de plusieurs centaines de microbes inclus dans le matériel de recherche ne révélera pas de modèles d'espèces. Il est nécessaire d'augmenter plusieurs fois le nombre de composants génétiques significatifs, ce qui permettra de les identifier. Ce problème est résolu par la méthode PCR.

La recherche concerne le domaine de la biologie moléculaire. L'ADN polymérase et les nucléotides libres sont ajoutés à l'ADN microbien. La polymérase est une enzyme qui assure plusieurs copies de la région souhaitée à partir des nucléotides disponibles. Le processus est démarré par des amorces - des brins ribo courts acide nucléique(ARN) qui s’attache au début du gène souhaité.

Le processus d'analyse se compose de plusieurs phases, dont chacune nécessite un certain temps et régime de température. En quelques heures, la quantité de matériel nécessaire à l'analyse est obtenue à partir d'un millième de gramme d'ADN bactérien. L'équipement moderne permet de copier à plusieurs reprises l'ADN d'une seule cellule, par exemple un spermatozoïde.

Avancement de l'étude

Étapes d'analyse :

• prélèvement de matériel biologique (sang, urine, sécrétions vaginales, salive, etc.) chez la patiente et livraison au laboratoire ;
• séparation de deux brins d'ADN dont l'entrelacement forme un chromosome et purification de ceux-ci des impuretés étrangères ;
• doublement de la section souhaitée du brin d'ADN, ce qui entraîne une augmentation de sa quantité progression géométrique;
• traiter le matériau résultant avec des solutions qui provoquent une luminescence spécifique des fragments d'ADN résultants ; cette coloration est utilisée pour reconnaître quelle bactérie ou quel virus se trouvait dans la source ; L'électrophorèse est utilisée pour séparer les fractions d'ADN.

La durée de l'analyse est de 4 à 5 heures.

Avantages de la méthode PCR

La réaction en chaîne par polymérase présente les avantages suivants par rapport aux méthodes traditionnelles d'identification des agents infectieux :

• détermination directe des gènes d'un micro-organisme, contrairement à la détection d'anticorps dirigés contre celui-ci dans de nombreuses autres méthodes d'identification ;
• la spécificité, c'est-à-dire la détermination d'un type spécifique d'agent pathogène ;
• sensibilité : même une cellule d'un micro-organisme suffit au diagnostic ; en général, la quantité requise d'agent pathogène est 10 fois inférieure à celle des autres méthodes ;
• la polyvalence du biomatériau - non seulement le sang est examiné, mais également les cellules des tissus denses, les grattages de l'épithélium, les sécrétions muqueuses et tout autre environnement où un microbe peut être présent ;
• la vitesse d'obtention des résultats est plusieurs fois supérieure à celle obtenue avec d'autres méthodes ;
• la capacité de reconnaître les infections chroniques, lentes et latentes ;
• désinfection du matériel prélevé sur un patient et prévention de la contamination du personnel de laboratoire ;
• automatisation complète du processus de recherche.

Inconvénients de l'analyse

Les inconvénients de la PCR sont principalement liés à sa complexité technique :

• il est nécessaire de choisir les bonnes séquences d'ARN - amorces, et également de préparer un mélange de nucléotides pour la synthèse de l'ADN ;
• la méthode est très sensible, donc s'il y a différents types de microbes dans l'échantillon, elle peut donner des résultats incorrects ;
• il est nécessaire de nettoyer soigneusement le matériel analysé des impuretés de protéines humaines et de médicaments, car ils réduisent la précision du diagnostic ;
• Une comparaison de contrôle des résultats avec des échantillons connus pour contenir ou non du matériel microbien, ainsi qu'avec des échantillons sans ADN, est nécessaire pour déterminer les erreurs et la contamination.

Les résultats faussement négatifs de la PCR sont causés par une violation de la technique d'analyse et des modifications de la séquence génétique de l'un des composants de la réaction. Des données faussement positives se produisent également lorsque les nucléotides des amorces et autres réactifs utilisés coïncident accidentellement avec l'un des gènes du micro-organisme.

L'isolement d'un micro-organisme n'indique pas toujours qu'il est à l'origine de la maladie. Il existe un autre problème lors de l’analyse de l’ADN humain : base génétique La plupart des maladies sont encore méconnues, ce qui rend impossible le diagnostic de pathologies non infectieuses au niveau microbiologique. C'est la direction génétique médicale se développe très activement.

Indications du test PCR

Cette analyse est utilisée dans les situations suivantes :

• la nécessité de détecter et d'identifier les virus, les bactéries et les protozoaires dans toute maladie infectieuse lorsque la précision du diagnostic est requise ;
• identification d'un individu par comparaison avec du matériel génétique d'origine connue ;
• analyse des tissus obtenus par la technique de l'aiguille fine, très difficiles à examiner par d'autres méthodes ;
• diagnostic de leucémie et de tumeurs malignes;
• mener des expériences avec la greffe de cellules souches embryonnaires chez des animaux (l'utilisation de telles cellules chez l'homme est interdite), ainsi que des lignées de reproduction de souris de laboratoire atteintes d'une maladie génétique prédéterminée.

Les perspectives d'utilisation de la réaction PCR et ses variantes en médecine et en biologie captivent l'imagination - depuis le test de nouveaux médicaments au niveau génétique jusqu'à la création d'organismes transgéniques dotés de propriétés spécifiées. Des travaux dans ce sens sont menés dans les plus grands laboratoires du monde, ce qui contribue à améliorer la méthode PCR au niveau appliqué pour le diagnostic des maladies infectieuses humaines.

En médecine, la méthode PCR est généralement utilisée pour diagnostiquer et évaluer l'efficacité du traitement des maladies suivantes :

• des infections intracellulaires, par exemple, ou ;
• maladies transmises par contact sexuel;
• Infection à Helicobacter pylori et bien d’autres.

Préparation à l'étude

3 jours avant le test, vous devez arrêter de boire de l'alcool. Certains médicaments, comme les antibiotiques, sont arrêtés sur prescription d'un médecin.

Règles de préparation au diagnostic des infections sexuellement transmissibles :

• 2 jours avant le test, arrêtez les rapports sexuels ;
• 2 heures avant le test, n'urinez pas ;
• ne vous douchez pas la veille et le matin ; il suffit de se laver eau chaude pas de détergents ;
• ne pas faire de tests PCR pendant et pendant 4 jours après (chez la femme).

Règles générales de préparation :

• 2 jours à l'avance hors intensif exercice physique, des sports;
• le matin du jour de l'étude, ne fumez pas et ne mangez pas ;
• Si le matériel provient de la bouche et du nasopharynx, ne vous brossez pas les dents le matin.

De faire ça règles simples La fiabilité de cette méthode de diagnostic précise mais coûteuse en dépend. Une interprétation indépendante du résultat ne fournira pas les informations nécessaires sur la maladie et son traitement. C'est pourquoi, après avoir reçu les données du test PCR, vous devez consulter un médecin.

Quel médecin dois-je contacter ?

Si une maladie sexuellement transmissible est suspectée, un gynécologue, un urologue, un andrologue ou un vénéréologue vous orientera vers une PCR. Une étude pour l'hépatite et l'infection par le VIH est prescrite par un spécialiste des maladies infectieuses et pour la tuberculose - un phthisiatre. La PCR est utilisée dans leur pratique par des médecins de nombreuses spécialités, par exemple les oncologues, les hématologues, les gastro-entérologues et les généticiens.

Les gens ont commencé à parler d’analyse PCR pour la première fois en 1983. Cette technique a été développée par Kary Mullis et les membres de son laboratoire. Depuis lors, la popularité de l’étude n’a cessé d’augmenter, car elle présente un nombre important d'avantages par rapport aux autres méthodes.

Aujourd’hui, le diagnostic PCR constitue la référence ou la norme pour identifier les infections et les agents pathogènes, en particulier ceux asymptomatiques. Tout d’abord, il s’agit d’un diagnostic préclinique.

Réaliser une analyse dans une machine PCR

L'essence de l'analyse PCR est que les séquences d'acides nucléiques (ADN ou ARN) caractéristiques d'un certain type d'agent pathogène sont clonées (augmentées plusieurs fois) dans un tube à essai.

L'abréviation PCR signifie réaction en chaîne par polymérase.

maison caractéristique de cette méthode est l'amplification, c'est-à-dire créer un grand nombre de copies du gène requis ou de son fragment. Tout cela est produit à l'extérieur du corps, c'est-à-dire in vitro.

Ainsi, si 20 cycles de PCR sont effectués, on obtient environ 1 million de copies ou plus. Cela permet de détecter une infection même lorsque sa quantité est insignifiante dans le matériel source, alors que les autres méthodes d'analyse sont impuissantes. Cela détermine la haute sensibilité de cette méthode.

En termes simples, vous pouvez faire l'analogie suivante : vous ne remarquerez pas un seul petit grain de sable sur le sol, mais après avoir augmenté le nombre de grains de sable un million de fois (PCR), un tas de sable sera déjà clairement visible .

Les principaux avantages du dépistage des infections par la méthode PCR sont :

• sensibilité la plus élevée et spécificité par rapport aux autres méthodes utilisées pour détecter les agents infectieux ;
• la capacité de détecter des micro-organismes dans diverses matières biologiques (sang, urine, sécrétions vaginales, salive, etc.) ;
• la capacité d'identifier simultanément plusieurs micro-organismes responsables, le cas échéant. A titre de comparaison, l'utilisation de méthodes bactériologiques n'offre pas une telle opportunité, car demande requise environnements différents pour cultiver divers microbes pathogènes;
• la possibilité de transporter du matériel biologique, car Pour identifier un pathogène, il n’est pas nécessaire de le maintenir en vie ;
• rapidité d'analyse;
• précision du diagnostic étiologique ;
• la possibilité de détermination quantitative des agents pathogènes - particulièrement importante pour les microbes opportunistes, qui ne sont capables de provoquer des maladies qu'après avoir atteint une certaine concentration ;
• la capacité de contrôler le déroulement du processus infectieux pendant le traitement.

Analyse PCR pour les infections

Actuellement, la majorité des maladies infectieuses sexuellement transmissibles (et autres) sont déterminées à l'aide de la méthode de réaction en chaîne par polymérase. Le diagnostic s'est répandu en raison de sa sensibilité et de sa spécificité élevées.

L'analyse PCR pour la chlamydia est particulièrement populaire.

Cela est dû au fait que ces micro-organismes vivent de manière intracellulaire, ce qui crée certaines difficultés dans leur détection.

Le diagnostic PCR permet de détecter même une quantité minime de chlamydia, ce qui, en règle générale, ne conduit pas encore à l'apparition de symptômes cliniques. Même la présence de seulement 2 molécules d'acides nucléiques dans le matériel de test permet d'identifier l'infection causale.

Et c’est la clé d’un traitement réussi, qui commence dès le stade préclinique.

Les infections sont également déterminées :

• hépatite virale;
• tuberculose;
• encéphalite à tiques;
• diverses maladies sexuellement transmissibles, etc.

Le diagnostic PCR vous permet de résoudre un certain nombre d'autres problèmes importants :

• surveiller le traitement et évaluer son efficacité ;
• détermination de la « charge virale », sur la base de laquelle une dose individuelle du médicament est sélectionnée ;
• identification de souches de micro-organismes pharmacologiquement résistants (insensibles aux médicaments).

Préparation à l'examen

Il n’est pas nécessaire de se préparer spécifiquement au test, qui sera réalisé selon la méthode PCR. Il est cependant très important qu'un spécialiste récupère le matériel conformément à toutes les conditions nécessaires stérilité.

Ainsi, par exemple, des systèmes de vide spéciaux doivent être utilisés pour prélever du sang, des tubes spéciaux doivent être utilisés pour prélever des sécrétions génitales, etc.

Dans certains cas, le matériel doit être transporté au laboratoire. Pour ce faire correctement, il est nécessaire de fermer hermétiquement le récipient contenant du matériel biologique. Cela empêchera la pénétration d'autres micro-organismes vivant dans l'environnement extérieur.

Les résultats de l'analyse PCR peuvent être de deux options :

• positif – agent pathogène détecté ;
• négatif – l’agent pathogène n’a pas été identifié.

Il faut savoir que même en l’absence de symptômes cliniques, un résultat positif peut être obtenu.

Dans ce cas, il est nécessaire de se concentrer sur les données de la réaction polymérase, car il permet d'identifier la maladie au stade préclinique.

Parfois, une réponse discutable peut être obtenue lorsque le nombre de copies détectées correspond à la limite supérieure de la normale. Pour clarifier la cause de la maladie, l'analyse doit être répétée, en accordant une attention particulière aux conditions de collecte du matériel biologique.

Quelle est la précision du diagnostic PCR ?

Les principaux avantages du diagnostic PCR peuvent être formulés sous la forme de plusieurs thèses :

• la possibilité d'obtenir un grand nombre de copies de micro-organismes pathogènes ;
• un grand nombre de copies est la clé d’un séquençage (détection) réussi.

Cela garantit une grande précision de l’analyse PCR pour la détection des agents pathogènes intracellulaires et des micro-organismes à croissance lente.

Par conséquent, la méthode est particulièrement informative pour identifier les mycobactéries tuberculeuses et d’autres agents infectieux similaires. Il a la plus grande précision et ne nécessite pas de revérification des résultats obtenus (sauf cas occasionnels).

Pour obtenir les résultats les plus fiables, il est nécessaire de remplir deux conditions de base qui empêchent une infection exogène (externe) :

• sélection correcte du matériel;
• transport correct.

Le site propose Informations d'arrière-planà titre informatif seulement. Le diagnostic et le traitement des maladies doivent être effectués sous la supervision d'un spécialiste. Tous les médicaments ont des contre-indications. Une consultation avec un spécialiste s'impose !

Dans quels domaines de la médecine cette méthode est-elle utilisée ?

• Isoler et cloner des gènes.
• Diagnostiquer les maladies génétiques et infectieuses.
• Déterminez la paternité. Un enfant hérite de certaines de ses caractéristiques génétiques de ses parents biologiques, mais possède sa propre identité génétique. La présence de certains gènes identiques aux gènes parentaux permet de parler d'établissement de relation.

Sur les scènes de crime, les médecins légistes collectent des échantillons de matériel génétique. Ceux-ci incluent : les cheveux, la salive, le sang. Par la suite, grâce à la technique de réaction par polymérase, l’ADN peut être amplifié et l’identité de l’échantillon prélevé peut être comparée au matériel génétique de la personne suspecte.

La réaction en chaîne par polymérase est utilisée efficacement en médecine :

• En pratique pneumologique - pour différencier les types bactériens et viraux de pneumonie, de tuberculose.
• Dans la pratique gynécologique et urologique - pour déterminer l'uréeplasmose, la chlamydia, l'infection à mycoplasmes, la gardnerellose, l'herpès, la gonorrhée.
• En pratique gastro-entérologique.
• En hématologie - pour la détermination des oncovirus et des infections à cytomégalovirus.
• Dans le diagnostic rapide de maladies infectieuses telles que l'hépatite virale, la diphtérie, la salmonellose.

Actuellement le plus courant cette méthode dans le diagnostic des maladies infectieuses ( hépatite d'étiologie virale, VIH, maladies sexuellement transmissibles, tuberculose, encéphalite à tiques).

Que se passe-t-il pendant la réaction ?

La réaction polymérase permet de détecter une infection, même si l'échantillon contenant du matériel biologique ne contient qu'une ou plusieurs molécules d'ADN de l'agent pathogène.

Au cours de la réaction, grâce à l'enzyme ADN polymérase, un doublement se produit ( réplication) section d'ADN. L'acide désoxyribonucléique lui-même ( abrégé en ADN) est important pour nous car il assure le stockage et la transmission de l'information génétique aux cellules filles. L’ADN a la forme d’une hélice constituée de blocs répétitifs. Ces blocs constituent les nucléotides, qui sont la plus petite particule ADN. Les nucléotides sont formés à partir d'acides aminés.

Le processus de réplication des sections d’ADN se produit au cours de cycles répétés. Dans chacun de ces cycles, non seulement le fragment d'ADN original est copié et doublé, mais également les fragments qui ont déjà été doublés lors du cycle d'amplification précédent. Tout cela ressemble au processus de progression géométrique.

Existe :

• Amplification naturelle ( c'est-à-dire le processus de copie et de multiplication de l'ADN), qui se produit dans notre corps et constitue un processus déterministe et prédéterminé.
• Amplification artificielle, qui se produit en raison de la réaction en chaîne par polymérase. Dans ce cas, le processus de copie est contrôlé et permet de dupliquer même de courtes sections d’acide nucléique.

Après trente à quarante cycles, le nombre de fragments atteint plusieurs milliards.

Pour l'amplification in vitro (in vitro) il est nécessaire qu'un fragment d'ADN étranger spécifique ( c'est-à-dire que l'ADN n'est pas celui du patient, mais celui de l'agent pathogène). Si la solution créée ne contient pas de fragment spécifique, la réaction en chaîne sous l'action de la polymérase ne se poursuivra pas. Ceci explique le fait de la haute spécificité de la PCR.

Étapes du diagnostic PCR

6. En effectuant une électrophorèse, les résultats sont résumés et les résultats de doublement sont calculés.

Quels sont les avantages de ce diagnostic ?

• Polyvalence : N’importe quel échantillon d’acide nucléique convient à cette méthode.
• Haute spécificité : l’agent pathogène possède des séquences uniques de chaînes d’ADN qui lui sont spécifiques. Les résultats de la PCR seront donc fiables : il est impossible de confondre le gène d'un pathogène avec le gène d'un autre pathogène.
• Sensibilité à la présence même d’une seule molécule pathogène.

• Petite quantité de matériel nécessaire à la recherche. Même une goutte de sang fera l’affaire. La capacité d’obtenir des résultats en utilisant un volume d’échantillon minimal est très importante pour les études pédiatriques, néonatologiques, neurologiques ainsi que pour la pratique de la médecine légale.
• La capacité de déterminer une infection indolente et chronique, et pas seulement aiguë.
• De nombreuses cultures pathogènes sont très difficiles à cultiver in vitro par d'autres méthodes, et réaction polymérase vous permet de propager la culture dans la quantité requise.

Quels sont les inconvénients de ce diagnostic ?

• Si le matériel destiné à la PCR contient l’ADN non seulement d’un pathogène vivant, mais également d’un pathogène mort, une amplification des deux ADN se produira. En conséquence, le traitement prescrit après le diagnostic peut ne pas être tout à fait correct. Après un certain temps, il est préférable de surveiller l'efficacité du traitement.
• Une sensibilité accrue à la présence de micro-organismes peut également être considérée, d’une certaine manière, comme un inconvénient. Après tout, le corps humain contient normalement une microflore opportuniste, c'est-à-dire des micro-organismes qui vivent dans les intestins, l'estomac et d'autres les organes internes. Ces micro-organismes ne peuvent nuire à l'homme que dans certaines conditions défavorables - non-conformité exigences d'hygiène, eau potable contaminée, etc. La technique PCR amplifie l’ADN même de ces micro-organismes, même si elle ne conduit pas à une pathologie.
• La PCR de différents systèmes de test peut donner des résultats qui diffèrent les uns des autres. Il existe de nombreuses modifications de cette technique : « imbriqué», « asymétrique», « inversé», « quantitatif» PCR et autres.

Méthodes modernes de haute technologie recherche en laboratoire nous permettent d’identifier les maladies à un stade précoce. Les maladies infectieuses se développent et évoluent, elles deviennent de plus en plus nombreuses et de plus en plus difficiles à identifier. Le diagnostic utilisant la méthode PCR (réaction en chaîne par polymérase) est l'un des plus récents et des plus précis. Pour son développement, le scientifique Kary Mullis a reçu le prix Nobel.

Réaction en chaîne par polymérase– une méthode de diagnostic génétique moléculaire qui permet de retrouver différents types de pathologies infectieuses et héréditaires chez l'homme, aussi bien en phase aiguë qu'en forme chronique, et bien avant que la pathologie ne commence à se manifester. La plupart des médecins sont confrontés quotidiennement à cette analyse et ne peuvent plus imaginer comment, sans elle, il est possible de poser le bon diagnostic et le bon stade de la maladie.

L'essence du diagnostic PCR

L'analyse PCR utilise les principes de la biologie moléculaire. Il utilise des enzymes spéciales qui copient de manière répétée des fragments d'ARN et d'ADN, ainsi que des micro-organismes responsables de maladies et présents dans le matériel biologique humain. La copie se déroule en plusieurs étapes, une réaction en chaîne se forme donc. Après cela, les spécialistes du laboratoire comparent les données obtenues avec une base de données commune et identifient les agents responsables de la maladie, ainsi que leur concentration. Le diagnostic est réalisé dans appareil spécial, qui refroidit et chauffe un tube à essai contenant un biomatériau et est appelé cycleur thermique. Le respect du régime de température affecte la véracité des résultats d'analyse.

Des fragments d’ADN de micro-organismes peuvent être contenus dans les matériels biologiques suivants :

• fluides biologiques;
• le sang et ses dérivés ;
• grattage de cellules épithéliales ou frottis ;
• urine;
• expectorations;
• mucus et autres sécrétions biologiques ;
• biopathies de la muqueuse tube digestif.

Où le diagnostic PCR est-il utilisé ?

Les possibilités de diagnostic des maladies infectieuses par réaction en chaîne par polymérase sont grandes ; elle peut être utilisée pour identifier une grande variété de virus responsables d'infections telles que :

N'est pas liste complète maladies détectées par analyse PCR. La plupart de ces pathologies sont stade précoce sont pratiquement imperceptibles, mais les conséquences de leur impact sur l'organisme sont extrêmement négatives et souvent dangereuses pour la santé et la vie humaines.

Les femmes enceintes se voient prescrire un test PCR pour détecter les infections sexuellement transmissibles, qui augmentent considérablement le risque de cancer du col de l'utérus et ont un effet néfaste sur le déroulement de la grossesse et la santé de l'enfant. Par conséquent, le diagnostic des MST est extrêmement important pour prévenir l’infection du fœtus par des micro-organismes pathogènes.

Sur la base de tout ce qui précède, nous pouvons conclure que diagnostic de laboratoire l'utilisation de la méthode PCR aide le médecin à établir un diagnostic précis et à prescrire un traitement efficace dans chaque cas individuel.

C'est intéressant! En plus de la médecine, la méthode PCR est également utilisée dans d'autres domaines, par exemple en médecine légale, lorsqu'il est nécessaire d'identifier à qui appartient le biomatériau trouvé sur une scène de crime, et parfois la PCR est utilisée pour déterminer la paternité, pour mener des expériences avec Mutation de l'ADN et autres expériences.

Avantages et inconvénients de la méthode

Les avantages du diagnostic PCR sont :

• la haute sensibilité du test permet d'identifier même des agents pathogènes uniques, ce qui permet d'identifier la pathologie à un stade précoce, sous des formes chroniques et latentes ;
• la polyvalence de la méthode permet l'utilisation de presque tous les biomatériaux pour la recherche, de la salive aux cellules de la peau ;
• large couverture - lors de l'examen d'un échantillon, il est possible de déterminer la présence de plusieurs agents pathogènes différents ;
• précision - haut niveau Cette méthode d'examen permet de ne pas donner de faux indicateurs ;
• rapidité - le résultat est prêt en moyenne en cinq heures, c'est-à-dire que le patient peut tirer la conclusion le lendemain après avoir soumis le biomatériau ;
• relativement bas prix– cette méthode de diagnostic ne diffère pas en termes de coût des autres tests de laboratoire sang;
• Grâce à cette méthode, des diagnostics précliniques et rétrospectifs peuvent être effectués. La première identifie les micro-organismes pathogènes avant même l'apparition de la maladie, et la seconde est réalisée après que la pathologie a été subie, ce qui permet d'empêcher le développement de la pathologie et de la guérir à temps, ainsi que de déterminer la forme latente du maladie qui survient sans symptômes évidents.

Mais il n'existe pas de méthodes de diagnostic parfaites, la PCR présente donc également des inconvénients :

• exigences élevées en matière de respect du processus technologique ;
• des exigences élevées en matière de professionnalisme des techniciens de laboratoire.

Conseil! Il est préférable d'effectuer une telle analyse uniquement dans les laboratoires les meilleurs et les plus professionnels, où des systèmes de contrôle de qualité stricts ont été mis en place.

Pour la fiabilité des résultats, il est nécessaire de suivre les règles de préparation préalable à l'analyse :

• lors du don de salive, vous ne devez ni manger ni boire de médicaments quatre heures avant le test ; avant l'intervention, vous devez vous rincer la bouche avec de l'eau bouillie, puis effectuer un petit massage cutané pour libérer la sécrétion de la glande ;
• L'urine est généralement collectée à la maison. Avant cela, il est nécessaire de laver les organes génitaux et de collecter 50 ml de la première urine du matin dans un récipient spécial ; il n'est pas conseillé de collecter du matériel pendant la menstruation ;
• Avant de donner du sperme, un homme ne doit pas avoir de rapports sexuels pendant trois jours, ne pas aller au sauna, ne pas prendre de bain chaud et ne pas prendre de boissons alcoolisées ou de nourriture épicée. Immédiatement avant le test, il est interdit d'uriner pendant trois heures ;
• Pour réaliser un frottis urogénital, il est recommandé de ne pas avoir de rapports sexuels pendant trois jours. Deux semaines avant le test, la prise de médicaments antibactériens est interdite. Pendant une semaine, vous devez arrêter d'utiliser des gels intimes, des pommades, des suppositoires vaginaux et des douches vaginales. Trois heures avant de prendre le biomatériau, il faut s'abstenir d'aller aux toilettes.
• Le sang est donné le matin à jeun.

Le matériel de diagnostic doit être collecté dans des conditions empêchant sa contamination, car cela peut affecter considérablement la véracité du résultat de la PCR.

Transcription de l'analyse

Le test peut donner un résultat positif ou négatif. Négatif signifie qu’il n’y a aucune suspicion d’infection dans le corps et que la personne est en bonne santé. Positif indique que le patient est malade et a besoin d’un traitement. Tout indicateur doit être déchiffré et exprimé par un médecin. Vous ne devez pas être contrarié ni avoir peur des mauvais résultats : une thérapie est prescrite en fonction de ceux-ci ; l'essentiel est de ne pas retarder le processus et de ne pas vous soigner vous-même.

Vous avez aimé notre article ? Partagez avec vos amis sur les réseaux sociaux. réseaux ou évaluez cet article :

(Pas encore de notes)

Je suis médecin généraliste, spécialiste généraliste. Ma compétence comprend les questions de diagnostic précoce des patients et de traitement de nombreuses maladies du tractus gastro-intestinal, des poumons et voies respiratoires, foie, reins, systèmes cardiovasculaire et génito-urinaire, maladies de la peau, troubles métaboliques, etc. 15 ans d'expérience en tant que médecin généraliste dans des cliniques de Moscou, dont 5 ont travaillé dans un hôpital de Saint-Pétersbourg. Je me ferai un plaisir de répondre aux questions du blog de mes lecteurs.

La PCR est le diagnostic des infections, un moyen moderne et très précis de détecter diverses maladies infectieuses. En quoi diffère-t-elle des autres analyses ?

Cette abréviation signifie « réaction en chaîne par polymérase ». Selon Wikipédia, il a été inventé en 1983 par Kary Mullis, un scientifique américain. Il a reçu le prix Nobel pour sa découverte.

Pendant un certain temps, la PCR n'a été utilisée que dans à des fins scientifiques, après quoi la médecine l'a emprunté avec succès. L’essence de l’étude est de reconnaître l’agent infectieux au niveau de l’ADN et de l’ARN. Chaque agent pathogène, s'introduisant dans l'ADN, modifie sa structure selon un certain type. C'est par le type d'ADN altéré que le laborantin comprend clairement quelle maladie se cache dans le corps humain. Les autres avantages de la PCR comprennent :

1. Identifier la cause profonde de l’infection qui a laissé des « traces » dans l’ADN. Lorsque plusieurs maladies se conjuguent, il est difficile d’identifier celle qui a tout déclenché. Et pour réglage correct diagnostic et sélection traitement efficace, la réaction en chaîne est d'une importance énorme ;
2. La PCR détecte non seulement l'ADN modifié, mais également le site spécifique de transformation. Cela est nécessaire pour éliminer les doutes sur les fausses infections ;
3. Les diagnostics PCR sont si sensibles qu’ils détectent même des bactéries et des virus isolés. Ils peuvent rester dans le sang après un traitement mal prescrit ou une interruption imprévue du traitement. Quantité minimale de diagnostic à décodage PCR- 10 cellules pathogènes. Les autres méthodes de test ne sont pas aussi efficaces ;
4. Les micro-organismes pathogènes sont détectés même en l'absence de symptômes prononcés d'une MST. Si une telle maladie est détectée à un stade précoce, son traitement ne prend pas autant de temps que ses formes avancées ;
5. Le patient reçoit les résultats de la PCR assez rapidement. Le diagnostic des infections ne prend pas plus de 4 à 6 heures. Avec le décryptage, l'ensemble du processus ne prend pas plus de 1 à 2 jours ;
6. Le matériel ADN prélevé une fois suffit pour réaliser 5 à 6 échantillons. Le patient n'aura pas à subir plusieurs frottis ;
7. La PCR et l'étude des infections ne s'arrêtent pas, ce domaine est en constante évolution. De nouveaux systèmes de test d'une sensibilité accrue sont inventés et le coût de la recherche est réduit. Si auparavant il n'était accessible qu'aux habitants des mégalopoles, les médecins des cliniques hospitalières des régions ne peuvent désormais imaginer identifier la maladie sans lui.

Caractéristiques de la méthode PCR :

1. Précision (les erreurs sont minimes et leur fréquence ne dépasse pas 0,01 %) ;
2. Sensibilité (le test « calcule » les bactéries individuelles présentes dans le sang et les frottis) ;
3. Spécificité (la PCR détecte les infections qui ne se manifestent souvent qu'à un stade sévère) ;
4. Unicité (les tests sont efficaces dans des situations où d'autres études ne trouvent rien).

Résultats de l'analyse PCR

Comment fonctionne la méthode de réaction en chaîne, comment se préparer à l'analyse ?

Une réaction en chaîne en laboratoire implique la reproduction répétée de différentes sections d’ADN et d’ARN afin de retrouver le lien très rompu. Les acides sont amplifiés (doublés) à l'aide de préparations enzymatiques. Grâce à des enzymes, le technicien de laboratoire obtient un nombre suffisant de copies de la région d'ADN pathogène pour comparer sa PCR avec des échantillons de certaines maladies provoquées par une infection.

Généralement, du matériel biologique prélevé par prélèvement ou par écouvillonnage est utilisé. Pour l'identification (déchiffrement des infections sexuellement transmissibles), un frottis est prélevé sur le vagin, le col ou l'urètre pour PCR. Parfois, l’urine est également utilisée.

Pour confirmer ou infirmer la présence d'une hépatite, d'une toxoplasmose ou du VIH, du sang est prélevé dans une veine. Le sang prélevé par piqûre au doigt donne souvent des résultats faussement négatifs. La mononucléose est diagnostiquée après avoir collecté du matériel dans le pharynx. La tuberculose peut être détectée après la collecte des crachats, qui sont abondamment libérés par les patients le matin.

Un frottis vaginal et cervical pour la PCR est un test simple dont vous ne devriez pas avoir peur. 2-3 jours avant, vous devez abandonner toute activité sexuelle. Pendant cette même période, il est interdit d’utiliser des gels et savons à base alcaline pour l’hygiène personnelle. Vous pouvez laver avec de l’eau chaude du robinet. Le dernier lavage a lieu le soir avant la visite matinale au laboratoire ou chez le médecin.

Il est également conseillé d'arrêter de traiter le muguet avec des crèmes, des pommades, des suppositoires ou des sprays, si cela est effectué. Un frottis est effectué dans les premiers jours après la menstruation ou immédiatement après. Pour obtenir des résultats plus précis, il est recommandé de ne pas aller aux toilettes pendant 2 à 3 heures avant de faire un frottis PCR.

Chez l’homme, un écouvillon est prélevé dans l’urètre pour provoquer une réaction en chaîne. Le matériel biologique est collecté à l'aide d'une sonde stérile ou d'un coton-tige inséré dans l'urètre. Pendant l’intervention, vous pourriez ressentir un léger inconfort ou une sensation de brûlure. Les hommes devront également renoncer temporairement aux produits sexuels et d’hygiène. Une semaine avant l'analyse, le traitement aux antibiotiques et autres médicaments est arrêté. Si l'inconfort persiste après le prélèvement, il est recommandé de contacter la clinique dans les plus brefs délais.

Disons que l'étude utilise du sang ou un prélèvement prélevé sur les organes génitaux du patient. Le matériel génétique est placé dans un appareil amplificateur PCR et des enzymes y sont ajoutées. L'ADN est chauffé à 90-95°C jusqu'à ce que la chaîne soit divisée en plusieurs maillons. Ce processus est appelé dénaturation. Pendant le fonctionnement du réacteur, des milliers de copies adaptées à l'analyse (décodage de la réaction) du résultat sont créées à partir d'un échantillon d'ADN et d'ARN.

Résultats du diagnostic PCR

La réaction en chaîne montre non seulement la présence d’une infection, mais aussi le nombre exact d’agents pathogènes présents. Développement dernières années- introduction artificielle de gènes de mutation dans l'ADN humain afin d'identifier une prédisposition à un changement de génotype.

Que révèle le diagnostic PCR des infections ?

Une transcription des résultats des tests est généralement examinée séparément par le médecin traitant. Les capacités de réaction en chaîne vous permettent de confirmer ou d'infirmer la présence des maladies suivantes :

Comme le montre clairement cette liste, le diagnostic PCR donne aux médecins de nombreuses spécialités spécialisées possibilités illimitées. La méthode peut être utilisée en pneumologie, virologie, infectiologie, oncologie, gastro-entérologie, hématologie, gynécologie et urologie.

Décodage PCR : résultats

Les tests de réaction en chaîne sont évalués uniquement par les médecins individuellement pour chaque patient, en tenant compte des pathologies existantes et des maladies chroniques. Les résultats des analyses PCR indiquent, comme mentionné ci-dessus, les caractéristiques quantitatives des bactéries pathogènes. En les consultant, le médecin déterminera la gravité et le stade de la maladie. Sur la base de ces indicateurs, le dosage des médicaments et la durée du traitement sont ensuite prescrits.

Un résultat PCR négatif signifie que le matériel biologique collecté ne contient aucune manifestation de virus ou d’infection. Une PCR positive est un signal d’alarme. Cela signifie qu’une infection a été détectée dans le sang et d’autres fluides biologiques du patient.

Si les valeurs sont minimes, cela peut indiquer un simple portage de la maladie, et pas seulement le développement actif de la maladie. Un simple porteur d'infection, détecté uniquement par PCR, mais ne présentant aucun autre symptôme, doit être surveillé en permanence par un médecin.

Il est important de ne pas paniquer et de se rappeler que la plupart de connu de la science les virus peuvent être traités avec des médicaments antibactériens. Seul un spécialiste qualifié et expérimenté dans le traitement d'une maladie particulière peut les sélectionner et les remplacer s'ils sont inefficaces.

Le décodage PCR peut être effectué non seulement à la demande d’un médecin, mais également à sa propre discrétion. Les femmes qui planifient une grossesse dans un avenir proche le font souvent pour s'assurer qu'il n'y a pas de maladies sexuellement transmissibles. Lors de son inscription à une consultation de quartier, une femme enceinte devra quand même se soumettre à ce type de diagnostic.

La PCR est obligatoire pour les femmes ayant subi plusieurs avortements ou fausses couches raisons diverses. Avant la FIV, une analyse est réalisée pour éliminer toutes les causes d'un éventuel rejet de l'ovule fécondé.

Les hommes ont tendance à effectuer une PCR après des vacances au cours desquelles ils ont eu une romance de vacances, voire plusieurs. Le diagnostic les aide à ne pas mettre en danger leur vie et la santé de leurs partenaires sexuels potentiels.

Souvent, la PCR devient la seule chance pour un patient de se débarrasser de la maladie. stade initial lorsque le risque de complications et d'évolution sévère est négligeable.